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低速離心機在中性粒細胞磁珠分選中的應用
發布時間:2018-07-25   點擊次數:1137次

試劑耗材及設備:磁力分選器,磁柱,CD15磁珠試劑盒,磁珠分選緩沖液50ml,RP1640,1ml 槍及槍頭,20微升槍與槍頭,蜀科低速離心機,15ml離心管4支,細胞計數板。 
步驟: 
1. 制冰,保證磁力分選器可以放入冰盒內操作,在4-8℃內進行分選;  
2. 配液磁珠分選緩沖液(50ml PBS液中含2mmol/L EDTA,0.5%BSA,PH=7.2);  
3. 將上步初步分選的中性粒細胞懸液用蜀科低速離心機300g離心10分鐘,去上清; 
4. 細胞重懸于磁珠分選緩沖液中,107細胞重懸于80微升緩沖液中;(如細胞數多按倍數增加) 
5. 107細胞中加入20微升CD15磁珠;充分混勻放入2-8℃避光孵育15分鐘; 
6. 用1-2ml緩沖液洗滌細胞/107細胞,再次用蜀科
低速離心機300g離心10分鐘,去上清; 

7. 重懸細胞于緩沖液中,108細胞重懸于500微升緩沖液中; 
8. 將磁力分選器置于冰盒中,用3ml緩沖液沖洗磁柱; 
9. 將含有中性粒細胞的緩沖液加入磁柱中; 
10. 用緩沖液沖洗磁柱,每次3ml,沖洗3次;  
11. 除去磁場,把磁柱放置于15ml離心管上,用5ml緩沖液加壓快速沖洗磁柱; 
12. 離心管中收集的便是中性粒細胞;  
13. 后用蜀科
低速離心機300g離心去上清,重懸細胞于10ml細胞培養液中,細胞計數。

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