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蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態細胞
發布時間:2017-08-01   點擊次數:1295次

  蜀科臺式低速離心機操作簡單、運行平衡、性能穩定、安全可靠,廣泛應用于臨床醫學,放射免疫、生物化學、食品衛生、環保等科研領域。今天來科普一下如何用蜀科臺式低速離心機制備大腸桿菌感受態細胞,給各位實驗室的朋友參考。
 

1.首先將受體大腸桿菌接種于LB培養基中活化,置于恒溫培養箱中37℃培養過夜。。。

2.接著取一丁點(槍頭沾一下)上述大腸桿菌培養物菌落接種于3-5毫升LB試管中,于恒溫振蕩器上,37℃振蕩培養過夜(約12-16 小時)。

4.再是用移液管無菌條件下,取過夜培養液1 毫升,接種于新鮮的LB 中(100毫升LB/250毫升三角瓶,接種量按菌液濃度而定,一般在1%左右),于恒溫振蕩器上37℃培養2―3 小時。

5.無菌條件下將上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中(離心管應帶蓋并高壓滅菌過),每組2支。

6、帶菌液的離心管置于冰上10 分鐘,冷卻菌液,平衡好,置于蜀科臺式低速離心機上,3500r/min 離心5 分鐘。

7、無菌條件下,倒去上清LB,倒斜離心管,讓LB 流干,留下沉淀菌體,加入預冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升,用微量取樣器輕輕吸沖底部沉淀菌體,使其懸浮后,把2支管轉為1支,搖勻后于冰浴中放置30分鐘。

8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺式低速離心機上,3500r/min離心10分鐘,小心側倒掉上清CaCl2 ,留沉淀菌體。

9、再把菌體懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中,置于冰上作為轉化的受體菌液。此制備的感受態細胞應在此步后1小時至24小時內使用,效率比較高。

10.在事先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 儲液和4μl IPTG儲液,用無菌玻棒將溶液涂勻,置于37℃下放置3-4小時,使培養基表面的液體完全被吸收,備用。

 

  上面的應用對大家有幫助嗎?操作中的蜀科TD-5Z臺式低速離心機榮獲2016“國產好儀器”殊榮,是國內各大實驗室、醫院、生物科技、食品環保等單位必備的儀器。如果您也有需要,趕快吧!

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